סינתזה של פפטיד ארוך|התאמה אישית של פפטיד שרשרת ארוכה|סינתזת פפטידים קשה|פפטידים מעל 50מר|מדע-פפטיד
מטא תיאור
צריך פפטיד ארוך עם יותר מ-50 חומצות אמינו? Science-שירות סינתזת הפפטידים הארוך של Peptide מכסה 50-189 חומצות אמינו, עם אסטרטגיית סינתזה מפולחת, מתגברת על הבעיות של צבירה הידרופוביה ויעילות סינתזה נמוכה וכו'. 20 שנים של ניסיון ואספקה יציבה. מוזמן לפנות אלינו.
פפטידים ארוכים: ככל שהם ארוכים יותר, כך הם גורמים ליותר צרות
מדוע קשה לייצר פפטידים ארוכים?
כל מי שעשה סינתזה של פפטידים יודע שהבעיה נוצרת כאשר שרשרת הפפטידים ארוכה: בתוך 20 חומצות אמינו, רוב החברות יכולות לעשות זאת. כשמדובר ביותר מ-40 חומצות אמינו, אנו מתחילים לבחור את הרצף. ב-60 חומצות אמינו או יותר, מספר החברות שיכולות להשתלט מצטמצם בחצי. כשמדובר בלמעלה מ-100 חומצות אמינו, אין הרבה חברות שמעיזות לעשות זאת.
מַדוּעַ? מכיוון שסינתזת פפטיד ארוכה נתקלת בכמה מלכודות:
יעילות הסינתזה יורדת: כל הארכה של חומצת אמינו, התשואה תופחת פעם אחת . 30 חומצת אמינו פפטיד, כל שלב של 99% תשואה, התשואה הסופית היא עדיין 74%; 60 חומצות אמינו, כל שלב הוא עדיין 99%, התשואה הסופית היא רק 55%. למעשה, התשואה של צעדים רבים לא יכולה להגיע ל-99%.
צבירה הידרופוביה: כאשר יש הרבה חומצות אמינו הידרופוביות בפפטיד ארוך, שרשרת הפפטידים מתחילה "להתקבץ" על השרף, וחומצות האמינו שמאחוריה אינן יכולות להיכנס.
קושי בטיהור: זמן השמירה של פפטידים וזיהומים ארוכים קרובים מדי זה לזה עבור חתך נקי.
מסיסות ירודה: כאשר הפפטיד מתקבל, לא ניתן להמיס אותו, ולכן לא ניתן לבצע את הניסוי.
היינו במהמורות האלה בעבר, ואנחנו יודעים איך לעקוף אותם.
מה אנחנו יכולים לעשות
1. אורך: 50-189 חומצות אמינו
|
טווח אורך |
קוֹשִׁי |
עשינו מצבים שבהם |
|
50-80 א.א |
מעמד הביניים העליון |
Routine program with >אחוזי הצלחה של 90%. |
|
80-120 א.א |
גָבוֹהַ |
צריך אסטרטגיית סינתזה מפולחת, מספיק ניסיון |
|
120-150 א.א |
גבוה מאוד |
עשיתי הרבה מהם, עד 150. |
|
150-189 א.א |
גבוה במיוחד |
רמת אתגר, עם סיפורי הצלחה |
2. אסטרטגיית סינתזה מפולחת
הדרך היעילה ביותר להתמודד עם פפטידים ארוכים היא לפלח אותם:
בחירת פלחים: חתכו את הפפטיד הארוך ל-2-4 מקטעים של 30-60 חומצות אמינו כל אחד. נקודת החיתוך צריכה להיות ממוקמת במיקום שבו קושי הסינתזה נמוך, למשל, הימנעות מהאזור ההידרופובי הרציף.
סינתזת שברים: כל שבר מסונתז ומטוהר בנפרד לטוהר גבוה מספיק.
שחבור שברים: חיבור שברים יחד בתמיסה או על שרף. שיטת ההצטרפות יכולה להיות כימית טבעית או אנזימטית.
קיפול: אם לפפטיד יש קשר דיסולפיד, יש לקפל אותו למבנה הנכון לאחר השחבור.
3. טוהר: תלוי בדרישות הניסוי
|
רמת טוהר |
תרחישים ישימים |
|
טהור קונבנציונלי (85-95%) |
שילוב של סינון ראשוני ניסיוני ופעיל |
|
טוהר גבוה (95-98%) |
ניסויים סלולריים, אימות פונקציונלי |
|
Ultrapure (>98%) |
לימודי מבנים, קריסטלוגרפיה |
כל פפטיד ארוך מלווה בדוח HPLC ו-MS, מה שהופך את נתוני הטוהר לשקופים.
4. שינויים: פפטידים ארוכים יכולים גם להוסיף פונקציה
תיוג פלורסנט: FITC, TAMRA, רוצה לראות לאן עובר הפפטיד הארוך.
ביוטין: משוך- למטה או בדוק.
תיוג איזוטופים: לכימות NMR או ספקטרומטריית מסה.
זרחון/גליקוזילציה: חיקוי שלאחר-שינויים תרגום.
למה לבוא אלינו לסינתזה של פפטיד ארוך?
1. אנחנו עושים את זה כבר 20 שנה
סינתזת פפטיד ארוכה היא לא משהו שכל אחד יכול לעשות. במהלך השנים טיפלנו בהרבה פפטידים ארוכים: שברי חלבון טרנסממברנלי, פפטידי היתוך ויראליים, חלבוני עמילואיד, פפטידים אנטי-מיקרוביאליים ועוד. יש לנו מושג טוב על אילו רצפים קל לצבור ואילו תנאים יכולים להציל אותם. אם אתם מגיעים אלינו לסינתזה של פפטיד ארוך, לפחות אתם לא צריכים לדרוך על הבור מההתחלה.
2. סינתזה חלקית: לא רק חיתוך לחתיכות
הפילוח נשמע פשוט, אבל היכן לחתוך, כמה זמן כל חלק ואיך לחבר אותם הם כולם חשובים. יש לנו כמה עקרונות:
חיתוך באזור ההידרופילי: הימנע מחיתוך הליבה ההידרופובי, אחרת המקטעים יצטברו מעצמם.
איזון בין אורך השברים: אל תהפוך קטע אחד לקשה במיוחד לביצוע ולקטעים אחרים לקלים במיוחד. 3.
בחירת נקודת חיבור: חיבורים כימיים טבעיים דורשים תיואסטר במסוף C- ו-Cys במסוף N-, שיש לתכנן מראש.
3. פפטידים הידרופוביים: מערכת ממיסים מיוחדת.
כמה פפטידים ארוכים הם כל כך הידרופוביים שלא ניתן לפתור אותם על ידי ממיסים קונבנציונליים, ולכן הם יתגבשו יחד על השרף בעת סינתזה. יש לנו מערכת ממיסים מיוחדת ותוספים כדי לשמור על מתיחה של שרשרת הפפטידים בתהליך הסינתזה, כך שחומצות האמינו הבאות יוכלו להיכנס.
4. בקרת איכות: נתונים בכל שלב
בקרת איכות של פפטידים ארוכים מורכבת יותר מזו של פפטידים קצרים:
בקרת איכות של תוצרי ביניים: לאחר סינתזה של כל שבר, מדוד תחילה את הטוהר והמשקל המולקולרי, ולאחר מכן המשך לשלב הבא לאחר מעבר הבדיקה.
ניטור תהליך שחבור: דגום את תגובת החיבור ומדדו את MS כדי לראות את יעילות החיבור.
בדיקת מוצר סופי: HPLC לטוהר, MS למשקל מולקולרי, MS/MS לתקינות הרצף (אופציונלי).
בדיקת מסיסות: ספקו ממיסים ושיטות מסיסות מומלצות, כדי שלא תקבלו פפטידים שאינם מתמוססים.
ביצוע סינתזת פפטיד ארוך, הנתונים מדברים בעד עצמם וניתן לעקוב אחר כל צעד.
5. ממיליגרם למאה מיליגרם, עד הסוף
מיליגרם לשלב ההקרנה, עשרה מיליגרם לשלב האימות, מאה מיליגרם למחקר המבני - אנחנו יכולים לקחת הכל. אותו פרויקט, אותו מקביל, אין צורך ב-הרמוניה מחדש.
למה ניתן להשתמש בפפטידים ארוכים?
|
תחומי מחקר |
שימושים נפוצים |
עשינו מצבים שבהם |
|
חלבוני ממברנה |
שברי טרנסממברנה, לולאות תאיות |
פפטיד ארוך עם מספר אזורים טרנסממברניים, הידרופובי מאוד |
|
חלבונים ויראליים |
פפטידים של פיוז'ן, דומיינים מחייבים-לקולטן |
שבר חלבון S חדש של קורונה, בסביבות 100aa |
|
עמילואיד |
א , -סינוקלין |
42aa היא הנורמה. ארוכים יותר נעשו |
|
פפטידים אנטי מיקרוביאליים |
פפטידים אנטי-מיקרוביאליים-ארוכים |
כמה פפטידים אנטי-מיקרוביאליים טבעיים הם רק 40-60aa |
|
ציטוקינים |
המדמה את האזור הפעיל |
50-80aa, עם קשרי דיסולפיד |
|
ביולוגיה מבנית |
NMR, קריסטלוגרפיה |
Isotopically labeled peptide, purity >98%. |
אספקה ובקרת איכות
- משלוח: אבקה ליאופיל, שפופרות צנטריפוגות או בקבוקונים, מוגנים בחנקן.
- מסמכים נלווים: COA (פרופיל HPLC + פרופיל MS), MS/MS (אישור רצף אופציונלי), דוח סינתזה (תהליך פילוח וחבור).
- בדיקות אופציונליות: תכולת פפטיד, אנדוטוקסין, לחות, הרכב חומצות אמינו, בדיקת מסיסות.
- אריזה מותאמת אישית: חלוקה וסימון לפי הדרישות שלך.
- כל מוצר Long Peptide Synthesis נבדק כפול-כדי לוודא שהרצף נכון והטוהר עומד בתקן לפני שליחתו.
שלושה מקרים-במציאות
מקרה 1: תוכנית חלבון ממברנה במכון מחקר
The customer needs a 85aa transmembrane peptide for structural study. This peptide has 60% of hydrophobic amino acids, so many companies could not make it. We used segmental synthesis, cut into three segments, each segment is about 30aa, purified and then liquid-phase ligated. The final purity of the peptide is >95%, והלקוח קיבל את זה ועשה NMR.
מקרה 2: תוכנית חלבון ויראלי של חברת תרופות רב לאומית
A 110aa viral fusion peptide with two pairs of disulfide bonds was required for inhibitor screening. We designed a segmented synthesis strategy to synthesize three linear fragments first, which were joined and then oxidized to form disulfide bonds. The final product was delivered with >90% טוהר, זיווג נכון של קשרי דיסולפיד, ועבר את אימות הפעילות.
מקרה 3: מחקר עמילואיד באוניברסיטה לאומית
The customer needs a 70aa fragment of alpha-synuclein for the study of aggregation mechanism. This peptide is easy to form fibers and always blocked the column during purification. We optimized the mobile phase conditions, added a small amount of organic solvent, and finally obtained a product with purity >95%, והלקוח ביצע בהצלחה ניסויי ThT.
מדברים על צרכי הפפטיד הארוכים שלך?
בין אם אתה רוצה פפטיד טרנסממברני 80aa או חלבון ויראלי 150aa, אתה יכול לדבר איתנו. אם תבקשו מ-Science-Peptide לעשות סינתזה של פפטיד ארוך, לפחות אינכם צריכים לנסות אחד אחד.
אני צריך שתגיד לי:
רצף פפטידים (או מידע יעד)
כמה (מיליגרם)
דרישות טוהר
אין להם קשרי דיסולפיד או שינויים אחרים
מתי אתה רוצה את זה?
תן לך הערכת היתכנות והצעת מחיר תוך 24 שעות.